关于光绪皇帝的死因，恐怕一直都是一个谜题了。其实这本来不是什么难事，问题就在于，光绪死后还不到一天的时间，慈禧也死了，再加上慈禧生前对于光绪的态度，就好像是她一定要确定光绪死后自己才咽气一样，所以长久以来也是众说纷纭。那么，事实究竟如何，光绪难道真的是非正常死亡的吗?有人说光绪死于砒霜，这是真的吗?
光绪帝的坟墓中留有若干头发、遗骨和衣服等，因而有关砒霜致死的结论，实际上比拿破仑要可靠得多。
一个皇帝是不应该随随便便死去的。他活着的时候，吃饭、出行，甚至做爱都不可能随随便便，何况死亡?当光绪腐败的尸体仅沾染在部分衣物和头发上的砒霜总量就已高达二百毫克的结果出来之后，人们想起了拿破仑。砒霜，一种古老的毒物再度走上了历史舞台。
三氧化二砷，俗称砒霜，分子式As2O3，是最具商业价值的砷化合物及主要的砷化学物料，无臭无味，外观为白色霜状粉末。这是某几种特定的矿物处理过程中产生的高毒性副产品，例如冶炼金矿、高温蒸馏砷黄铁矿，冷凝其白烟，就可得到砒霜。
光绪三十四年三月初九的“脉案”，御医曹元恒写下了这番话：皇上“肝肾阴虚，脾阳不足，气血亏损”，病势到了无药可用的严重程度。同年五月初十的“脉案”，御医陈秉钧写有“调理多时，全无寸效”的话。江苏名医杜钟骏为皇帝看过病后也表示，“不求有功，只求不出差错”。同年九月的“脉案”指出，此时光绪的病状更加复杂多变，脏腑功能已全部失调。
也许这些档案有利于推翻光绪被毒死的结论，但英国驻华公使窦纳乐推荐的洋医的诊断结论也不可忽视，他说光绪“血脉皆治，无病也”。
和死在光绪八十七年之前的拿破仑相比，两者的共同点在于多年幽禁的郁郁寡欢，死亡之前的突发急症。
历史上，砒霜家族就是毒药之王。这种完全无臭无味而又容易携带的毒药，在许多家族财产的继承表演中扮演了重要角色。由于砷中毒的症状和腹泻、食物中毒、霍乱以及一些正常疾病的症状相似，所以它成为杀手们常备的首选药物。宋太宗杀死李煜之后，又陆续有多位皇族成员去世。人们说，这位皇帝在毒物学上造诣颇深，估计就是对砷化物有深入研究。
光绪帝自从新政以来一直都受慈禧的摆布。可以说无一天有实权，光绪帝可以说是一个比较悲惨的皇帝了。和同治帝相比较，可以说是千差万别。同治帝作为慈禧的亲生儿子，活动范围和政权掌握的都要更加宽泛一些，溥仪时代，慈禧已经去世没有实习的摆布，溥仪也是舒舒服服的统治了几年。只有光绪帝执政的时候，由于接受了民族主义的思想，想要进行维新变法，但慈禧长期干政保守派，实力太强，最终以失败告终，光绪被囚禁多年一直都没有什么作为，甚至连死都是不明不白的，至今光绪帝的死因都是一个谜团。
由于慈禧和光绪帝是前后死亡，相差还不到一天，这也是非常让人可疑，所以光绪帝的死因，让很多人都非常好奇，溥仪皇帝曾经证明光绪帝是被毒药毒死，说他已经掌握了一手的证据，当时的皇帝的御医也非常确定，声称光绪帝虽然体质不加掩饰，也不凉，但这些原因并不是他死亡的依据。
利用现代科学技术，我们发现有很多科学家都在推测光绪的死因，曾经推断出是因肺结核。或者是一些急性感染导致正常死亡。但通过检查，光绪帝的衣物以及头发，发现其实并没有那么简单，当时一共检查了八个人的样本，和光绪帝同处于一个时代的隆裕皇后，和诸多大臣等，发现光绪帝的头发当中。砷的含量非常高，已经达到正常人的几百倍左右，即使是和他生活在同一时代的人，光绪帝头发砷的含量也非常高。
而检测到的砒霜含量也是达到正常人中毒死亡的砒霜含量，甚至要高出几倍，这也都能够充分地证明。光绪帝中毒时服用砒霜的含量有多高?那么到底是谁给光绪帝下的毒?有很多人推测是慈禧，但并不一定。因为当时袁世凯和李莲英都有嫌疑。